BackgroundUsing the US Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) human tetracycline breakpoints to predict minocycline and doxycycline susceptibility of Staphylococcus pseudintermedius (SP) isolates from dogs is not appropriate because they are too high to meet pharmacokinetic/pharmacodynamic data using a standard dose. New breakpoints have been approved for doxycycline and proposed for minocycline. Revised breakpoints are four dilutions lower than tetracycline breakpoints, providing a more conservative standard for classification of isolates. Hypothesis/ObjectivesThe objectives of this study were to measure minimum inhibitory concentrations (MICs) of minocycline and doxycycline of 100 canine meticillin-resistant SP clinical isolates, compare their susceptibilities to minocycline and doxycycline based on current and revised standards, and document their tetracycline resistance genes. MethodsE-test strips were used to determine MICs. PCR was used to identify tet genes. ResultsUsing the human tetracycline breakpoint of MIC4g/mL, 76 isolates were susceptible to minocycline and 36 isolates were susceptible to doxycycline. In contrast, using the proposed minocycline breakpoint (MIC0.25g/mL) and approved doxycycline breakpoint (MIC0.125g/mL), 31 isolates were susceptible to both minocycline and doxycycline. Thirty-one isolates carried no tet genes, two had tet(K) and 67 had tet(M). Conclusions and clinical importanceUse of the human tetracycline breakpoints misclassified 45 and five of the isolates as susceptible to minocycline and doxycycline, respectively. PCR analysis revealed that 43 and five of the isolates classified as susceptible to minocycline and doxycycline, respectively, possessed the tetracycline resistance gene, tet(M), known to confer resistance to both drugs. These results underscore the importance of utilizing the proposed minocycline and approved doxycycline canine breakpoints in place of human tetracycline breakpoints. Resume ContexteL'utilisation des seuils critiques d'humaine du CLSI (US Clinical and Laboratory Standards Institute) pour la tetracycline afin de predire la sensibilite de Staphylococcus pseudintermedius (SP) des chiens a la minocycline et a la doxycycline chez les chiens n'est pas approprie, etant trop eleves pour correspondre aux donnees de pharmacodynamie/pharmacocinetique d'une dose standard. De nouveaux seuils critiques ont ete approuves pour la doxycycline et proposes pour la minocycline. Les seuils critiques revises sont quatre fois plus bas que ceux de la tetracycline fournissant un standard plus conservatif pour la classification des isolats. Hypotheses/ObjectifsLes objectifs de cette etude etaient de mesurer les concentrations minimales inhibitrices (MICs) pour la minocycline et la doxycycline de 100 souches de SP resistant a la meticilline, de comparer leur sensibilite a la minocycline et a la doxycycline base sur les standards actuels et revises et de documenter leurs genes de resistance a la tetracycline. MethodesDes bandelettes E-test ont ete utilisees pour determiner les MICs. Une PCR a ete utilisee pour identifier les genes tet. ResultatsA l'aide de la valeur critique d'humaine de la tetracycline, MIC 4 lg/mL, 76 souches etaient sensibles a la minocycline et 36 souches etaient sensibles a la doxycycline. A contrario, en utilisant les seuils critiques proposes pour la minocycline (MIC 0.25 lg/mL) et le seuil critique approuve pour la doxycycline (MIC 0.125 lg/mL), 31souches etaient sensibles a la fois a la minocycline et a la doxycycline. Trente et une souches ne portaient pas de gene tet, deux portaient tet (K) et 67 portaient tet (M). Conclusions et importance cliniqueL'utilisation des seuils critiques de tetracycline humaine a mal classe 45 et cinq des souches en tant que sensibles a la minocycline et a la doxycycline respectivement. La PCR a revele que 43 et cinq des souches classees comme sensibles a la minocycline et a la doxycycline respectivement, possedaient le gene de resistance a la tetracycline, tet (M), connu pour conferer une resistance aux deux molecules. Ces resultats soulignent l'importance de l'utilisation des seuils critiques proposes pour la minocycline et approuve pour la doxycycline a la place des seuils critiques d'humaine de la tetracycline. Resumen Introduccionutilizar los puntos de interrupcion de la tetraciclina humana del Instituto de estandares clinicos y Laboratoriales de los Estados Unidos (CLSI) para predecir la susceptibilidad a minociclina y doxiciclina de aislados de Staphylococcus pseudintermedius en perros no es apropiado porque son demasiado altos para obtener datos de farmacocinetica/farmacodinamica utilizando la dosis. Nuevos puntos de interrupcion han sido aprobados para doxiciclina y propuestas para minociclina. Los puntos de interrupcion revisados son cuatro diluciones menores que los puntos de interrupcion de tetraciclina, aportando un estandar mas conservador para la clasificacion de los aislados. Hipotesis/Objetivoslos objetivos de este estudio fueron medir las concentraciones inhibidoras minimas (MICs) de minociclina y de doxiciclina para 100 aislados caninos de Staphylococcus pseudintermedius resistentes a meticilina, y comparar sus susceptibilidades a minociclina y doxiciclina basados en estandares actuales y revisados, asi como documentar los genes de resistencia a tetraciclina. Metodostiras de prueba E se utilizaron para determinar las MICs. Se utilizo PCR para identificar los genes tet. Resultadosutilizando los puntos de interrupcion de la tetraciclina humana de MIC 4 lg/mL, 76 aislados fueron susceptibles a minociclina y 36 aislados fueron susceptibles a doxiciclina. En contra, utilizando los nuevos puntos propuestos de interrupcion para minociclina (MIC 0.25 lg/mL) y aprobado para doxiciclina (MIC 0.125 lg/mL), 31 aislados fueron susceptibles tanto para minociclina como doxiciclina. 31 aislados no portaban genes tet, dos tenian de tet (K), y 67 tenia tet (M). Conclusiones e importancia clinicael uso de los puntos de interrupcion de la tetraciclina humana clasifico de forma erronea 45 y cinco de los aislados como susceptibles a minociclina y doxiciclina, respectivamente. El analisis mediante PCR revelo que 43 y cinco de los aislados clasificados como susceptibles a minociclina y doxiciclina, respectivamente, poseian el gen de resistencia a tetraciclina, tet (M), que confiere resistencia a ambos farmacos. Este resultado destaca la importancia de utilizar los propuestos puntos de interrupcion de minociclina y aprobados para la doxiciclina en lugar de los puntos de interrupcion de tetraciclina humana. Zusammenfassung HintergrundDie Verwendung der Tetrazyklin Messpunkte des Menschen aus dem US Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), um die Minozyklin und Doxyzyklin Empfindlichkeit auf Staphylococcus pseudintermedius (SP) Isolate von Hunden vorherzusagen, ist ungunstig, da sie zu hoch liegen, um pharmakokinetischen/pharmakodynamischen Daten unter Verwendung einer Standarddosis zu entsprechen. Neue Messpunkte fur Doxyzyklin sind bestatigt worden und fur Minozyklin sind neue Messpunkte vorgeschlagen worden. Die revidierten Messpunkte liegen um vier Verdunnungen niedriger als die Messpunkte von Tetrazyklin, was einen konservativeren Standard zur Klassifizierung der Isolate ergibt. Hypothese/ZieleDie Ziele dieser Studie waren minimale inhibitorische Konzentrationen (MICs) von Minozyklin und Doxyzyklin auf 100 Methicillin-resistente SP aus klinischen Isolaten zu messen, ihre Empfindlichkeiten auf Minozyklin und Doxyzyklin, basierend auf den momentanen und den revidierten Standards zu vergleichen, und ihre Tetrazyklin Resistenzgene zu dokumentieren. MethodenEs wurden E-Teststreifen zur Bestimmung der MICs verwendet. PCR wurde eingesetzt, um die tet Gene zu identifizieren. ErgebnisseBei Verwendung des menschlichen Tetrazyklin Messpunktes einer MIC 4lg/ml waren 76 Isolate auf Minozyklin und 36 Isolate auf Doxyzyklin empfindlich. Im Gegensatz dazu waren bei Verwendung des vorgeschlagenen Minozyklin Messpunktes (MIC0,25lg/ml) und des bestatigten Doxyzyklin Messpunktes (MIC0,125lg/ml) 31 Isolate empfindlich auf sowohl Minozyklin wie auch Doxyzyklin. Einunddrei ss ig Isolate trugen kein tet Gen, zwei hatten tet (K) und 67 hatten tet (M). Schlussfolgerungen und klinische BedeutungDurch die Verwendung der humanmedizinischen Tetrazyklin Messpunkte wurden 45 der Isolate falschlicherweise als empfindlich auf Minozyklin und funf der Isolate als empfindlich auf Doxyzyklin beurteilt. Die PCR Analyse zeigte, dass 43 der Isolate, die als empfindlich auf Minozytklin bzw die funf Isolate, die als empfindlich fur Doxyzyklin beurteilt wurden, ein Tetrazyklin Resistenzgen, tet (M), welches bekannt dafur ist, Resistenzen gegenuber beiden Wirkstoffen zu ubertragen. Die Ergebnisse unterstreichen die Wichtigkeit die vorgeschlagenen Minozyklin bzw die bestatigten Doxyzyklin Messpunkte anstelle der Tetrazyklin Messpunkte aus der Humanmedizin zu verwenden.
