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- [3] 利用基因组特异性引物和Cas12a介导技术快速检测稻瘟菌小麦致病型[J]. 康厚祥,彭烨,Kangyu Hua,邓雨飞,Maria Bellizzi,Dipali Rani Gupta,Nur Uddin Mahmud,Alfredo S.Urashima,Sanjoy Kumar Paul,Gary Peterson,周益林,周雪平,Md Tofazzal Islam,王国梁.Engineering. 2021(09)
向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立
被引：4
|作者：
邝瑞瑞
[1
,2
]
雷荣
[1
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江丽
[1
]
段维军
[3
]
李雪莲
[3
]
符娜
[4
]
范在丰
[2
]
李远
[5
]
吴品珊
[1
]
机构：
[1] 不详
[2] 中国检验检疫科学研究院
[3] 不详
[4] 中国农业大学植物保护学院
[5] 宁波检验检疫科学技术研究院
[6] 伊犁师范大学
[7] 重庆医科大学永川附属医院
[8] 不详
来源：
基金：
国家重点研发计划;
关键词：
向日葵黑茎病菌;
RPA;
CRISPR-Cas12a;
荧光检测;
侧向流层析试纸条;
D O I：
10.16688/j.zwbh.2022401
中图分类号：
S435.655 [向日葵病虫害];
学科分类号：
摘要：
向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌，是我国的植物检疫性有害生物。为了准确快速检测向日葵黑茎病菌，本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异，设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法。通过条件优化，RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下，RPA反应30 min, CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌。荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当，最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg。由于试纸条检测结果可用肉眼观察，快速便携，操作简单，更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测；而荧光检测灵敏度高，对环境要求高，更适合用于实验室检测。
引用
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