益肾健骨丸对KOA软骨细胞AMPK/Cyclin Y/CDK16通路活性及细胞自噬的影响

目的 探讨益肾健骨丸对膝骨关节炎(KOA)软骨细胞AMPK/Cyclin Y/CDK16通路活性及自噬的影响。方法 在接受人工全膝关节置换术KOA患者软骨组织中提取软骨细胞，筛选最佳给药浓度及时间后，将其分成模型组(Modle)、对照组(Control)、AMPK激活剂组(AICAR)、AMPK抑制剂组(Compound C)、益肾健骨丸组(YSJGP)和AMPK抑制剂+益肾健骨丸组(Compound C+YSJGP),除模型组、对照组外，其余各组给予相对应的药物干预。使用CCK8法检测益肾健骨丸对软骨细胞活性的影响，qRT-PCR和Western blot检测软骨细胞中AMPK、Cyclin Y、CDK16 mRNA和蛋白表达以及ULK-1、Beclin 1、p62 mRNA和蛋白的表达及LC3Ⅱ/Ⅰ的比值，使用透射电镜观察自噬小体，并利用激光共聚焦观察LC3Ⅱ蛋白相对表达。结果 YSJGP可显著提升LPS诱导的软骨细胞中AMPK/Cyclin Y/CDK16通路活性，增加ULK-1、Beclin 1的活性及LC3Ⅱ/Ⅰ的比值，减少p62的表达，并可增加软骨细胞中自噬小体的数量及LC3Ⅱ的荧光强度，其对软骨细胞的影响与AICAR趋势一致，而Compound C干预则与之相反；此外，Compound C还显著抑制了YSJGP对AMPK/Cyclin Y/CDK16通路活性及ULK-1、Beclin 1、p62、LC3Ⅱ/Ⅰ的调节，逆转了YSJGP对软骨细胞自噬活性的调控作用。结论 益肾健骨丸能提升KOA软骨细胞自噬活性，其机制与上调AMPK/Cyclin Y/CDK16通路活性密切相关。