K88抗原基因的克隆与表达——Ⅰ.K88抗原工程菌的研制

由产肠毒素大肠杆菌引起的仔猪黄痢病是在世界各地广泛流行的一种仔猪急性腹泻病。已经表明K88伞毛抗原在这类致病菌定居在仔猪小肠上起着重要的作用。质粒pTK82是从国内流行的仔猪黄痢病致病菌——大肠杆菌青3菌株中分离出来的。它是一个分子量约为50×10～6道尔顿的非接合型质粒,并含有K88ac抗原基因的决定子。在电子显微镜下可以观察到带有pTK82的大肠杆菌C600的细胞表面存在有K88伞毛。此质粒DNA经限制性内切酶HindⅢ酶解后,使DNA片段连接到同样经内切酶酶解过的的pBR322 DNA上,得到了一株能产生K88抗原的转化子,经鉴定后,此重组质粒定名为pTK63。pTK63DNA经EcoRⅠ都分酶解,然后重新连接起来,得到分子量较小但仍含K88基因的重组质粒pTK90。免疫学分析的结果表明,带有重组质粒pTK90的大肠杆菌C600所产生的伞毛抗原的性质,与带有pTK82质粒的大肠杆菌C600菌株或大肠杆菌青3菌株所产生的伞毛是相同的,大肠杆菌C600/pTK82和大肠杆菌C600/pTK90菌株都是不带肠毒素基因的菌株,初步试验表明用它们制成的菌苗可以有效地预防仔猪黄痢病的发生。