MNX1在乳腺癌组织中的表达及功能研究

目的研究运动神经元和胰腺同源盒1(MNX1)在乳腺癌组织中的表达,通过构建MNX1沉默的MDA-MB-231细胞株,检测MNX1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学功能的作用。方法收集广西医科大学第一附属医院乳腺癌73例患者的73对乳腺癌组织和邻近正常组织进行回顾性研究,采用qRT-PCR检测MNX1在组织和细胞中的相对表达,使用Western blotting检测组织中MNX1的蛋白质水平。我们设计了MNX1的shRNA,构建了低表达的MNX1病毒载体。病毒载体进一步用于感染三阴性乳腺癌细胞。设计沉默效果最好的MNX1靶向沉默乳腺癌细胞株MDAMB-231作为沉默组(shMNX1),设计空载体慢病毒感染的阴性对照组(Control)以进行后续的细胞功能实验。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,每个实验至少有3次独立实验,正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果 qRT-PCR结果显示,在乳腺癌组织中MNX1基因的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。Western blotting显示乳腺癌组织中MNX1基因的蛋白表达水平明显高于邻近组织(P<0.01)。CCK-8实验结果显示,沉默组乳腺癌细胞在24、48和72 h的外径(450 nm)低于阴性对照组(P<0.05),可以认为沉默MNX1基因可抑制乳腺癌细胞的增殖。Transwell结果显示,迁移实验中,沉默组和阴性对照组通过跨室的细胞数分别为217.00±33.23和490.00±45.56;侵袭实验中,沉默组和阴性对照组通过跨室的细胞数分别为91.00±12.79和419.00±49.37,可以认为沉默MNX1基因可以抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移和侵袭能力。在流式细胞术检测细胞凋亡中,沉默组乳腺癌细胞凋亡率为(3.81±0.41)%,阴性对照组为(2.13±0.16)%。沉默组乳腺癌细胞凋亡率高于阴性对照组,说明沉默MNX1基因促进乳腺癌细胞株MDA-MB-231的的凋亡。结论 MNX1在乳腺癌组织中高表达,沉默MNX1基因的表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。