cDNA文库法在HCV-1b检测芯片研制中的应用

被引：8
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作者：
孙朝晖
郑文岭
彭翼飞
张宝
吕梁
马晓冬
马文丽
机构：
[1] 南方医科大学基因工程研究所
[2] 广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所
[3] 南方医科大学基因工程研究所 广州510515
[4] 广州510010
来源：
中国生物化学与分子生物学报 | 2005年 / 03期
关键词：
丙型肝炎病毒; 限制性显示; 分子克隆; 基因芯片; 杂交; 诊断;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.2005.03.021
中图分类号：
R446.5 [微生物学检验];
学科分类号：
100208 ;
摘要：
制备丙型肝炎病毒(HCV) 1b亚型诊断芯片并进行初步验证评价.采用cDNA文库法制备探针,用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV 1b全长cDNA ,所得的酶切片段72℃补平加A ,AT克隆,PCR初步鉴定,并测序.将筛选出的片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片并进行杂交验证分析.运用cDNA文库法,得到2 2个大小相对一致(2 5 0～75 0bp)的基因片段.序列分析表明,均属于HCV 1b基因,可以作为诊断芯片探针;样品标记采用限制性显示(restrictiondisplay ,RD)技术,标记后进行杂交.杂交结果显示,样品和诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳.批内和批间精密度CV值分别为5 4 %和6 8% ,表明用cDNA文库法收集片段是一种快速、简便制备芯片探针的实用方法.
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