猪圆环病毒2型LAMP-CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

被引：2

作者：

毛首会 ^{[1
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杜国玉 ^{[1
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刘晓波 ^{[2
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吴锦艳 ^{[1
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兰喜 ^{[1
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何继军 ^{[1
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尚佑军 ^{[1
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王桂琴 ^{[2
]}

刘永杰 ^{[1
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机构：

[1] 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

[2] 宁夏大学农学院

来源：

中国兽医科学 | 2024年 / 54卷 / 06期

关键词：

猪圆环病毒2型; CRISPR/Cas12a检测; 环介导等温扩增;

D O I：

10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0116

中图分类号：

S852.651 [];

学科分类号：

摘要：

本研究旨在建立一种快速、准确且易于操作的猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)检测方法。首先以PCV2的ORF2基因作为靶基因，设计4条LAMP与5条CRISPR特异性引物，再分别优化获得LAMP反应体系和CRISPR检测体系中各成分最佳配比浓度，经过特异性、灵敏度、重复性以及符合性验证，最终建立了快速检测PCV2的LAMP-CRISPR/Cas12a方法。结果显示，该方法最小检测量接近1 copy质粒DNA，灵敏度远高于本实验室常用的PCR方法，且在相同条件下只有PCV2呈阳性结果，其他均呈现阴性，表明特异性良好。同时该方法具有良好的重复性，批内变异系数小于5%，批间变异系数小于10%，该方法与qPCR之间的符合率较高，可通过肉眼观察在蓝光下的反应产物判断结果。结果表明，建立的LAMP-CRISPR/Cas12a体系适用于PCV2的快速检测。

引用

页码：728 / 734

页数：7

共 15 条

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